Direct la conținutul paginii »

Inocularea mediilor de cultură cu drojdii de bere

Folosirea mediilor cu agar permite păstrarea îndelungată a varietăților de drojdie cu costuri și echipament minim. Într-un articol anterior am explicat pe îndelete metoda de preparare a mediului de cultură, iar în acest articol vom vorbi despre inocularea propriu-zisă a mediului.

Pentru a realiza inocularea, avem nevoie de o ansă pentru inoculare (se poate confecționa dintr-un fir rigid din aliaj care nu corodează și e rezistent la căldură – preferabil ceva inox), recipientul cu mediul de cultură și o flacără (bec bunsen, spirtieră sau o torță cu butan; a se evita folosirea flăcării de aragaz, având în vedere că nu are o înălțime destul de mare pentru a steriliza eficient).

Dezinfectarea ansei de inoculare la bec bunsen

Masa de lucru va fi dezinfectată în prealabil cu un produs pe bază de clor, iar camera în care se efectuează operația ar trebui să fie cât mai lipsită de praf și de curenți de aer. Bucătăria ar fi teoretic cel mai ușor loc de curățat, totuși fiind folosită la gătit există riscul contaminării cu diverse bacterii și drojdii sălbatice aduse odată cu alimentele a mediilor de cultură. Eu personal folosesc bucătăria, care este departe de a fi un exemplu de curățenie. Un pulverizator cu alcool 70% este foarte util pentru dezinfectarea rapidă a anumitor zone, iar un acvariu nefolosit așezat pe o parte poate fi folosit pe post de cameră sterilă.

Trebuie să avem la îndemână sursa drojdiei (pachetul de drojdie lichidă – igenizat în prealabil la exterior în soluția preferată de igenizare: iodophor, StarSan, OneStep, Chemipro OXI).

După deschiderea pachetului, conținutul se varsă în mustul de bere ce trebuie fermentat sau într-un recipient pentru realizarea unui starter. Ansa de inoculare sterilizată în prealabil în flacără (trebuie adusă la incandescență) se introduce în pachetul gol (există destulă drojdie pe pereții acestuia pentru a face o cultură) și se șterge de pereții interiori ai pachetului. Nu este necesară prezența vizuală a particulelor de drojdie pe ansă, ba chiar este contraindicat.

Fiind folosit ca sursă direct pachetul de drojdie, putem fi siguri de puritatea acesteia, iar ansa se va introduce într-o eprubetă cu mediu înclinat, fără a atinge pereții acesteia, plasând încărcătura de drojdie pe mediu prin frecarea ușoară a ansei de acesta (suprafața mediului nu trebuie înțepată), încercând o distribuție pe o suprafață cât mai mare a mișcării.

După închiderea eprubetei cu dopul de rigoare, aceasta se va lăsa câteva zile la temperatura camerei (sunt necesare aproximativ 24 de ore pentru a sesiza vizual activitatea de creștere).

Apariția coloniilor independente de drojdie ne-infectată e semn bun!

Dacă totul a decurs cum trebuie, ar trebui să observăm apariția de colonii de drojdie, de culoare alb-crem. Prezența altor tipuri de colonii: colorate sau filamentoase indică o contaminarea a mediului.

Eprubetele necontaminate se vor introduce în frigider, în zona cea mai rece a acestuia (spate sus), într-o pungă de tip zip-lock, nu înainte de a le eticheta în vreun fel cu varietatea drojdiei și data inoculării.

În cazul în care sursa drojdiei nu este pachetul de drojdie lichidă, este destul de probabil să fie prezente și alte organisme în proba recoltată. Este necesară în această situație inocularea inițială a unei plăci petri, pentru a putea asigura o mai bună separare a coloniilor de drojdie.

Pașii pentru realizarea acestui lucru sunt asemănători cu cei de la inocularea eprubetelor.

Pașii pentru inocularea plăcilor petri cu drojdie de bere

Cu ansa sterilă se recoltează drojdia și se depune în punctul 1 de pe placă. Ansa se sterilizează și se răcește prin puncția mediului de cultură într-un loc neinoculat. Se trece apoi la împrăștierea celulelor din punctul de inoculare (pasul 2 din imagine), sub forma a câteva linii distincte. Se acoperă vasul cu capacul, se rotește 60 de grade în sens trigonometric. Ansa va fi sterilizată din nou și răcită ca mai înainte, după care se execută mișcăriile sugerate de pasul 3 din imagine, având ca scop distribuirea cât mai distanțată a celulelor de drojdie. Operația de mai înainte se repetă încă o dată pentru a acoperi toată suprafața mediului, cu ultima mișcare șerpuită acoperind și triunghiul rămas (pasul 4).

De menționat este că vasul petri ar trebui ținut deschis cât mai puțin timp, având grijă să menținem mereu capacul deasupra vasului și să-l deschidem doar cât e necesar pentru pătrunderea ansei de inoculare.

La fel ca la eprubete, se lasă câteva zile la temperatura camerei, cu mediul de cultură la partea de sus. În acest moment ar trebuie să observați pe placă apariția de colonii individuale, dacă totul a decurs cum trebuie. Se poate observa ușor diferența între o colonie de drojdie și una bacteriană, cele bacteriente având forme de obicei perfect circulare și altă culoare. De asemenea, coloniile de drojdie ar trebui să fie majoritare.

Colonii de drojdie de bere

Mai departe se va proceda la recoltarea a câteva colonii sănătoase de drojdie și plasarea lor într-o eprubetă după metoda descrisă mai sus. De reținut: plăcile petri sunt inferioare eprubetelor cu mediu înclinat pentru păstrarea pe termen lung a culturilor.

În articolele următoare vom descrie pe larg metoda prăparării unui starter, pornind fie de la o cultură pe mediu agar, fie de la conținutului unui pachet de drojdie lichidă.

Articol scris pe 14 aprilie 2011 de Cristian Dumitru.

Categorii: Blog, Sfaturi pentru berari.

Cuvinte cheie: , , , , , , , , , , , , , .

Ți-a plăcut articolul?

  •  

19 comentarii Comentează și tu »

  1. Bogdan

    #1

    Salut,
    in primul rand felicitari pentru ce ai realizat prin acest blog/site,
    as avea o sugestie, ca sa nu folosesti ansa, nu ar fi mai bine sa rupi ambalajul drojdii lichide, si sa atingi agar-agaru din frotiu cu ambalaju? bineinteles cu manusi (dezinfectate) pe mana, masca la nas si undeva ferit, gen acvariul pe care il pomeneai.
    al doilea rand, dupa ce am vazut pe Dicovery o emisiune cu berari, in care au colectat drojdii salbatice din Egipt si au facut o bere, imi vine in cap sa fac la fel, sa colectez drojdii de prin livezi/vii si sa incerc a face bere cu ele. Esti interesat de o asemenea “vanatoare”?

  2. Cristian Dumitru

    #2

    Soluţia cu rupt ambalajul ar merge pentru plăci petri, însă pentru „long term storage” sunt de preferat eprubetele şi în eprubete nu prea poţi să inoculezi decât cu ansa.

    Legat de „vânătoarea” de drojdii – sunt persoane care au făcut aşa ceva şi rezultatele variază. Probabil e interesant să vezi „ce prinzi”, însă mai toate organismele care produc bere bună pot fi găsite sub formă de cultură pură şi pentru mine e mai practic să pornesc de la asta.

  3. Ion

    #3

    Salut, de unde iti cumperi ustensilele (ansa, eprubete, petri etc)? Eu nu am gasit nici un magazin care sa vanda la persoane fizice si in cantitati ceva mai mici.

  4. Cristian Dumitru

    #4

    Eprubete am găsit la un moment dat pe okazii. Erau noi, la vreo 50 de bani fiecare (cu capac cu filet).

    Petri şi ansă am adus de aici http://www.brouwland.com/en/ prin intermediul http://fabrica-de-bere.ro/, care îi este distribuitor în România.

    Oricum, teoretic de petri nu ai nevoi, doar dacă ai vreo cultură mixtă (sau contaminată) şi vrei să separi drojdia. Ansă de inoculare poţi să faci din orice sârmă/tijă.

    Pe de altă parte, magazinele româneşti nu vând aparatură de laborator la persoane fizice (nu ştiu exact de ce) şi la sume care sunt sub câteva mii de lei strâmbă oricum din nas.

    Sunt sigur însă că multe lucri ai putea să le cumperi de pe ebay de la chinezi. Costurile de transport sunt decente.

    • Ion

      #5

      Chiar voiam sa caut la Brouwland, oricum de la fabrica-de-bere imi cumpar ingredientele.
      O sa mai caut eprubete si o sarma de inox subtirica.
      Din China nu prea as mai comanda ca m-am saturat de doamnele “cumsecade” de la posta vamala…dar probabil tot acolo o sa ajung ca imi trebuie si o bara pentru agitare.
      Mersi!

    • ion

      #6

      Am gasit pe ebay unele relativ ieftine, dar sunt din plastic si au dop flush, nu cu filet. Ale tale sunt din sticla sau nu are nimic ca sunt din plastic?

  5. Cristian Dumitru

    #7

    Ideea ar fi să meargă a fi sterilizate la 120°C. Poţi să foloseşti orice care rezistă la sterilizarea în oala cu presiune.

  6. Sergiu

    #8

    Salut

    Felicitari pentru blog.

    As vrea sa cultiv drojdii de bere, dar slants nu pe cutii Petri. Binenteles ca m-am lovit de aceeasi problema cand am vrut sa cumpar cateva eprubete autoclavabile. Nicio firma nu vinde sub 100 buc, si la niste preturi prohibitive. Am gasit pe ebay, din China, dar scump, 5 buc la $15. Stii vreo alta sursa, la preturi decente? Mersi.

  7. Sergiu

    #9

    Agar agarul folosit l-ai cumparat de pe http://www.brouwland.com sau din tara, pt. ca se gaseste si la noi?

    Poti sa ma ajuti sa cumpar de undeva eprubete si sticlarie de laborator, pahar Erlenmeyer si pahar Berzelius ?

    Mersi mult.

  8. Sergiu

    #10

    Ai folosit cumva DME ca si suport nutritiv in agar sau nu?

  9. Cristian Dumitru

    #11

    Agar poți să iei de aici, mult mai ieftin decât varianta oficială de laborator http://www.produseasiatice.ro/produs/agar-agar-42-g/612.html

    Eprubete am întrebat pe tipul de la care le-am luat eu, să văd dacă mai are. Îți dau un mail dacă da cu datele lui de contact.

    Trebuie să pui DME sau must cu agarul desigur. Eu prefer must dintr-o bere cu mai mult hamei. E mai safe pe termen lung împotriva infecțiilor cu alte organisme.

  10. Sergiu

    #12

    Am gasit in Cluj, dar e praf si e la gramaj mai mare (60 g fata de 45 g) si la un pret mai mic decat daca l-as cumpara de pe net.

    Cred ca o sa mearga. Doar sa gasesc eprubete.

  11. Ion

    #14

    Eu am cumparat eprubete de aici http://www.okazii.ro/antichitati-sticla-cristal/sticle/eprubete-sticla-a134147528
    Cand am luat eu scria in anunt ca are si cu filet si capac, din acelea am luat eu.
    Poti sa intrebi daca poate sa mai faca rost.
    Alte vase as vrea si eu sa mai cumpar, pahar Erlenmeyer si pahar Berzelius, ca si tine, dar nu am gasit pana acum.
    Anunta-ne daca gasesti eprubete la cel de pe okazii, poate o sa mai fie si altcineva interesat.

  12. Bogdan

    #15

    http://goo.gl/maps/WCy38
    aici e un magazin cu sticlarie, de unde am luat pahar Erlenmeyer de 3 litri cu vreo 30 ron, facut din sticla Pirex, care isi face treaba.

  13. Sergiu

    #16

    Stii cumva numele firmei? Eu locuiesc in Cluj si as prefera sa cumpar online.

  14. Sergiu

    #17

    Adresa corespunde fostei fabrici de sticla Stiteh sau Sticerom, care a fost inchisa.

  15. sticlarie laborator

    #19

    Magain online de sticlarie pentru laborator http://whiteoak.ro pentru cei interesati.

Comentează și tu!

Lasă și tu un comentariu la Inocularea mediilor de cultură cu drojdii de bere